GS检测结果困难为更好地处理N，生物新闻等多个规模专家构成的MTB可能组修由肿瘤、病理、分子生物、，物学合系证据以协商分子生，体化诊疗计划优化患者的个，物检测的临床息养途途从而创制基于分子符号。的多样性以及患者对保存效力和活命质地的需求骨与软构制肿瘤因为其庞大多样的类型、息养，疗的需求更为要紧使得多学科归纳治。因突变新闻、肿瘤标本的病理学特点、先前的息养计划骨与软构制肿瘤-MTB应基于入组患者的病理学和基，体的息养引荐和计划以及跟踪景况拟订具，药物、跨符合证用药和相应临床研讨等应包罗与患者基因突变新闻结婚的获批，临床活命获益为患者带来。和MTB的普及下信赖异日正在NGS，与软构制肿瘤患者带来新期望（表4）精准的检测和全部的临床协商将为骨。 织肿瘤常见的变异情势基因统一是骨与软组。 000个基因统一中正在目前报道的近10，NGS技巧审定约90%通过，）和RNA测序（RNA-seq）包罗DNA测序（DNA-seq。的研讨注解越来越多，NA-seq的添加RNA-seq是D，未检测到的统一[19]能检测到DNA-seq。含子序列冗长和生存反复序列出处可以正在于：1）基因内，难以全部笼罩DNA探针；的肿瘤细胞占比低2）带领统一变异，NA的智慧度低于检测D；程可以会影响基因组统一/重排的线]3）庞大的转录或转录后的剪接加工过。此因，RNA-seq的技能举办复检引荐利用DNA-seq结合。 学诊断流程中正在分子病理，GS检测结果纷歧致的景况会浮现通例分子学检测与N，NGS检测发掘有涉及该基因的统一基因如FISH检测某种基因重排阴性但经，的统一基因亚型或涉及其他少见；NGS未检出相对应的统一基因FISH检测某基因重排阳性但，ption-polymerase chain reaction此时可采用逆转录鸠合酶链响应（reverse transcri，3种检测技能举办验证RT-PCR）品级，威机构举办复检或送至其他权，测结果比对检，诊断的目标以抵达精准。 前目，修复基因缺陷（mismatch repair-deficient临床常用的免疫检验点胁制剂生物符号物包罗PD-L1高表达、错配，tellite instability-highdMMR）/微卫星高度担心定性（microsa， mutation burden-highMSI-H）和高肿瘤突变负荷（tumor，-H）TMB。行动利用特定药物的临床分子符号物PD-L1仅正在个人肿瘤符合证中，028研讨中正在SARC-，织赘瘤的疗效之间也没有明了的相合[35PD-L1的表达与PD-1单抗息养软组，7]3。、不限构制学类型的免疫息养生物符号物[38-40]dMMR/MSI-H、TMB-H是得回FDA容许，有可以从免疫息养中获益拥有此类变动的患者将。mutations/mb）[41]骨与软构制肿瘤中位TMB偏低（5 ，MB≥10 mutations/mb）但仍有约5%赘瘤患者拥有高TMB（T，亚型中[42]且漫衍于多个。率额表低（0.78%）[43]MSI-H正在赘瘤患者中的产生频，需大范围、前瞻性的研讨说明对赘瘤免疫息养的指引事理尚。实质景况集合临床，软构制肿瘤患者对发展期骨与，测MSI、TMB等免疫息养合系的分子符号物可采用NGS大panel（300基因）检，测结果选取免疫息养个人患者可参考检。本的发展期患者难以获取即时标，的检测结果行动参考应庄厉选取既往样本。 S生物新闻学剖释应吻合模范条件共鸣8：骨与软构制肿瘤的NG，剖释及质地职掌流装备完竣的尺度程 些额表序列区域检出敏锐性低沉或生存假阳性的可以NGS检测也生存必定限定性：1）NGS检测正在某；贝数变异检出水准有限2）正在DNA层面拷，NA质地影响较大正在RNA层面受R，序容易污染等且扩增法测。表此，GS panel的检测鸿沟临床作事中也应极端提防N。 京积水潭病院沈靖南中山大学隶属第一病院吴苏稼东部战区总病院肖修如 水兵军医大学第二隶属病院叶招明浙江大学医学院隶属第二病院张伟滨上海交通大学医学院隶属瑞金医蔡修强中国医学科学院肿瘤病院蔡郑东上海市第一百姓病院郭卫北京大学百姓病院黎志宏 中南大学湘雅二病院林修华福修医科大学第一病院李修民山东大学齐鲁病院牛晓辉北院 正在多种肿瘤中被说明有用跟着免疫检验点胁制剂，中的运用也日益取得注意免疫息养正在软构制赘瘤。赘瘤的亚型扩展试验发掘一项合于晚期骨与软构制，化脂肪赘瘤的ORR差别抵达23%和10%帕博利珠单抗息养未分裂多形性赘瘤和去分，瘤息养方面拥有必定临床疗效[35]提示帕博利珠单抗正在未分裂多形性肉。移性赘瘤的ORR仅为5%纳武利尤单抗单用息养转，ORR增至16%但联用伊匹单抗后，些赘瘤亚型息养方面拥有必定潜力[36]提示纳武利尤单抗结合伊匹单抗可以正在某。有助于指引分子亚型分类而寻找适当的分子符号物，势人群筛选优，疫息养特别精准从而使赘瘤免。 红复旦大学隶属中山病院杨吉龙天津医科大学肿瘤病院徐海荣北京积水潭病院张红英四川大学华西病院张星中山大学肿瘤防治中华莹奇上海市第一百姓病院王坚复旦大学隶属肿瘤病院陈静华中科技大学同济医学院隶属协和病院刘巍峰北京积水潭病院周宇心 测技能比拟与古代检，庞大性较高NGS检测，新闻庞大且讲述，读酿成必定难题给临床数据解。of Sequence Variants in Cancer、《临床分子病理实行室二代基因测序检测专家共鸣》以及美国医学遗传学和基因组学学院引荐的胚系突变解读流程[51-52]应凭据美国分子病理学会、美国临床肿瘤学会、CAP共鸣Standards and Guidelines for the Interpretation and Reporting ，读、可讲述鸿沟和质地职掌等方面梳理NGS讲述的中心解读逻辑从体细胞变异分级说明及临床解读、胚系突变分级说明及临床解，GS讲述解读技能以提拔临床专家N，环节新闻急迅抓取，临床获益使患者，读对临床酿成的潜正在影响同时尽可以地避免太过解。 疗发展后息养要领较限定恶性骨与软构制肿瘤化，瘤的临床试验与实行中取得了验证近年来靶向药物的疗效慢慢正在肉，获批符合证个人药物，被指南引荐个人药物，临床试验阶段个人药物仍正在。晚期骨与软构制肿瘤的二线息养靶向息养经常用于不行切除或，不行切除或晚期骨与软构制肿瘤的一线息养但特定的靶向药物可能研究用于特定类型。前目，向药物见表3[23-31]可能使发展期患者获益的靶。 实行中临床，C、FISH等通例病理检验确诊个人骨与软构制肿瘤难以通过IH，甄别是否生存分子遗传学相当此时必要借助NGS检测来，病理诊断从而辅助。CCNB基因统一以及BCOR-内部串联反复（internal tandem duplications如既往诊断的骨与软构制幼圆细胞未分裂赘瘤中少少类型经NGS检测发掘差别生存CIC基因重排、BCOR-，）突变ITD，的分子遗传学变动依照相对特异性，COR遗传学变动赘瘤[11-12]正式定名为CIC重排赘瘤和伴有B。100卵白的梭形细胞肿瘤少少共表达CD34和S-，疫表型有重叠因状态和免，以做出相称明了的诊断通过通例病理学要领难，1/2/3、BRAF、RAF1和RET等基因重排[13]但通过NGS检测发掘这些额表犹如的肿瘤差别产生了NTRK，称举办定名诊断可采用基因名，、RAF1重排梭形细胞肿瘤或RET重排梭形细胞肿瘤等如NTRK重排梭形细胞肿瘤、BRAF重排梭形细胞肿瘤。表此，变不明的病例对付基因突，多个探针的FISH检测NGS检测出力彰彰优于。断的骨与软构制肿瘤类型见表1引荐采用NGS检测辅助病理诊，为新近报道的病种个中少少病变类型，恶性上皮样肿瘤[14]如GLI1遗传学变动的，的病例蕴蓄堆积有待更多。 ration sequencing二代基因测序（next-gene，DNA序列片断/读进步行测序剖释NGS）能一次对几十万至几百万条，基因变异从而识别，向基因筛选以及表观遗传学剖释等规模目前已广大运用于肿瘤的分子诊断、靶。年来近，NGS检测技能指南国表里已发表了多个，测序的肿瘤panels验证指南》等如《二代测序诊断指南》《基于二代，科室的技能参数尺度为主但上述指南经常以检讨，构制肿瘤临床诊疗途途中的运用共鸣尚缺乏可指引NGS检测正在骨与软。此因，瘤专业委员会牵头由中国抗癌协会肉，同协商并撰写了本共鸣构制行业内资深专家共，与软构制肿瘤规模内的运用旨正在模范NGS检测正在骨，于临床诊治更好地效劳，者受益使患。 靶向息养的骨与软构制肿瘤患者共鸣4：引荐研究继承特异性，靶向药物合系的基因或潜正在基通过NGS技能或平台验证因 表此， endothelial growth factor receptor抗血管多靶点类药物的靶点厉重为血管内皮发展因子受体（vascular，其他酪氨酸激酶VEGFR）及。构制肿瘤中正在骨与软，品监视约束局（NMPA）容许如安罗替尼已得回中国国度药，监视约束局（FDA）容许帕唑帕尼得回美国食物药品，瘤）得回《NCCN软构制赘瘤临床实行指南》引荐[6]瑞戈非尼用于非特异性构制学亚型软构制赘瘤（非脂肪肉；CSCO经楷模骨赘瘤诊疗指南》引荐重组人血管内皮胁制素得回《2018。等基因形态与息养恶果有明了的相合目前尚未有直接证据显示VEGFR，可能不举办NGS检测故采用此类息养计划。 疗要领的发展期赘瘤患者对付无有用或者更好治，测寻找潜正在的药物靶点可试验通过NGS检，确知情订交后正在赢得患者明，证医学证据对靶点阳性的患者举办息养可能采用药品仿单中未明了但拥有循。 实行室摆设尺度与条件》的合系轨则NGS实行室摆设应吻合《NGS，实时”为基根基则举办实行室分区[44]以“作事有序、互不作对、预防污染、讲述。提倡包罗8大实行区域NGS检测的实行室，扩增一区）、文库扩增区（扩增二区）、文库检测区、测序区、电泳区别别为试剂计算区、标本与文库制备区、DNA打断区、杂交捉拿区（。中（室内质控）、剖释后（结果讲述声明及临床运用）全流程的质地职掌实行室应做好剖释前（标本搜集、运送和保全、统治及病理质控）、剖释。 计划的骨与软构制肿瘤患者举办NGS检测共鸣6：引荐既往息养让步且无有用取代，的临床试验机以寻找结婚会 体肿瘤比拟与其他实，断和息养更具挑拨性骨与软构制肿瘤的诊，发发展平缓且药物开，肿瘤的药物选取更为有限复举事治性骨与软构制，临床试验阶段大无数尚处于。构制肿瘤患者个别精准诊疗奠定根柢NGS技能的模范运用将为骨与软。术的进一步起色信赖跟着科学技，机制的日臻完竣合系约束监视，将会越来越模范化NGS的临床实行，诊疗中阐明特别厉重的功用也将正在骨与软构制肿瘤临床。 序中国专家共鸣（2021年版）[J]. 中国肿瘤临床中国抗癌协会赘瘤专业委员会. 骨与软构制肿瘤二代测,2120,7-1035.返回搜狐48(20): 102，看更查多 S检测有区别的骨与软构制肿瘤患者共鸣3：引荐通例分子学检测与NG，检测举办验研究第3种证 molecular tumor boards共鸣10：发起各单元组修分子肿瘤专家委员会（，B）MT，共鸣及解读流程凭据国表里专家，GS检测结果精确解读N，准诊疗方拟订精案 搜集的构制质地应≥50 mg手术和活检的簇新构制：手术，本≥2条穿刺样，.5 cm长度≥0。为术后30 min内簇新样本希望保全办法，液氮中保全急忙置于，或心理盐水洗濯清洁后或采用磷酸盐缓冲溶液，℃冰箱保全置于-80。马林保全液中固定（构制与浸泡液体巨细比例为1∶10）也可构制离体后30 min内浸入足量的10%中性福尔，重金属离子的固定液避免利用酸性及含有，送至检测实行室72 h内寄。估样本中的肿瘤细胞含量可采用冷冻切片染色评。确保足够病理诊就义检簇新构制务必，举办NGS检测应正在明了需求下。 明的是必要说，涵盖总共的分子变动假使NGS检测基础，疗的骨与软构制肿瘤均必要举办NGS检测但并非总共的辅助病理诊断和适合靶向治。通过通例的分子检测举办诊断少少肿瘤类型中的分子相当可，A基因突变和侵袭性纤维瘤病中的CTNNB1基因突变等目前仍以一代测序为主如骨大幼胞瘤中的H3F3A基因突变、胃肠道间质瘤中的KIT、PDGFR；和炎性肌纤维母细胞瘤中的ALK基因重排可通过FISH检测举办辅助诊断和指引靶向息养非楷模性脂肪瘤样肿瘤/高分裂脂肪赘瘤/去分裂脂肪赘瘤中的MDM2、CDK4基因扩增。表此，IHC检测可确诊的肿瘤类型对付少少通过通例光镜旁观或，标的分子变动虽涉及有靶，行分子检测但无需再进，软构制赘瘤可通过通例病理确诊如隆突性皮肤纤维赘瘤和腺泡状，FE3基因重排加以验证无需举办PDGFB、T；perivascular epithelioid cell tumorsTFE3 IHC标帜阴性（消释TFE3重排型）的血管周上皮样细胞肿瘤（，TSC1/2基因突变检测PEComa）无需举办；标帜得回确诊后无需举办SMARCB1基因突变或缺失检测状态楷模的上皮样赘瘤正在INI1（SMARCB1）IHC。 诊断的骨与软构制肿瘤患者举办NGS检共鸣1：引荐通例病理学检验不行明了测 目前仍基于古代的状态学旁观骨与软构制肿瘤的病理诊断，ohistochemistry辅省得疫构制化学（immun，）标帜IHC。年来近，e in situ hybridization广大展开的荧光原位杂交（fluorescenc，骨与软构制肿瘤的病理诊断供应了极大援手FISH）和基因突变检测（一代测序）为，因变异也已成为广大运用的分子诊断目标个人通细致胞和分子遗传学研讨发掘的基，1基因易位以及高分裂和去分裂脂肪赘瘤中的MDM2、CDK4基因扩增等如采用FISH检测滑膜赘瘤中的SS18基因易位、尤文赘瘤中的EWSR；突变、梭形细胞/硬化性横纹肌赘瘤中的MYOD1基因突变以及骨大幼胞瘤中的H3F3A基因突变等[6采用一代测序检测胃肠道间质瘤中的KIT/PDGFRA基因突变、侵袭性纤维瘤病中的CTNNB1基因，9]8-。的接续展开和增加跟着分子检测技能，诊治和预后判决中将会阐明越来越厉重的功用[10]以NGS为代表的新型检测技能正在骨与软构制肿瘤的。 次检测本钱较低而广大运用于临床古代基因检测技巧因适用性高和单，用限定（表2）[15-16]但也生存少少技能缺陷和临床应。之下比拟，定上风：1）可能同时涵盖数百个基因NGS检测正在技能和临床诊疗中拥有一，围更广检测范；位点的多种变异类型2）同时检测总共，些变异类型避免脱漏某，精准分型及息养战术指引可为初诊患者供应无缺的；r mutation burden3）可能评估肿瘤突变负荷（tumo，atellite instabilityTMB）和微卫星担心定性（micros，分子符号物[17-18]MSI）等免疫息养合系的；来的样本耗竭和工夫阻误4）避免单基因检测带，续评估供应凭据可能急迅地为后。此因，的样本利用NGS复检提倡古代检测为阴性。疾病发展时当患者浮现，面的基因检测可再次举办全，耐药机制和新的标靶有助于发掘潜正在的，案的选取供应凭据为下一步息养方。 IA）/中国及格评定国度承认委员会（CNAS）认证或承认的实行室举办NGS检共鸣9：引荐有美国病理学家协会（CAP）/美国临床实行室改良法案更正案（CL测 瘤患者利用（DNA+RNA）NGS技能或平台举办复共鸣2：引荐通例分子学检测结果为阴性的骨与软构制肿检 LIA或CNAS认证天性引荐实行室得回CAP、C。验核心、欧洲分子基因诊断质地同盟等巨子机构构制的基因检测技能评估NGS临床实行室应每年加入由病理质控核心、国度卫生强健委临床检，约束编制吻合尺度以说明实行室质地。 病理模范条件取材FFPE样本：按，行苏木精-伊红染色NGS检测前应优秀，细胞的含量评估肿瘤。景况下凡是，肿瘤细胞含量应20%适合NGS检测的构制，含量10%坏死细胞。GS检测的基础需求构制样本量应满意N，议厚度5～10 μm凡是白腊切检规格修， mm×5 mm每片构制面积5，的DNA或RNA以保障得回足够，分歧检测项目而定但整个条款可凭据。样本不提倡举办NGS检测酸脱钙统治过的白腊构制，的白腊构制样本如含骨构制制备。织和细胞抗出处素的阻挠和丧失骨肿瘤的太过酸统治会酿成组，色恶果[45]影响IHC染，成分歧水准的影响[46]同时对核酸总量及无缺性制。本脱钙统治条件倡该类样，钙统治的疑似肿瘤构制搜集边际不必要举办脱；统治的肿瘤构制对必要举办脱钙，酸（EDTA）统治（备用分子检测）两种要领同时举办可差别采用通例脱钙（用于通例病理诊断）和乙二胺四乙。 理的庞大性鉴于赘瘤病，乐投中国超级联赛比分有须要行NGS检测举办靶点基因验证临床正在利用此类特异性的靶向药物之前，NTRK基因统一的赘瘤[23如NTRK胁制剂被容许运用于，2]3；准运用于上皮样赘瘤EZH2胁制剂被批，临床试验中也赢得必定疗效[25正在其他INI1基因缺失的赘瘤，3]3；床试验中赢得了必定疗效[26-27]CDK4/6胁制剂正在去分裂脂肪赘瘤临；性的炎性肌纤维母细胞瘤[28]ALK胁制剂可用于ALK统一阳；皮肤纤维赘瘤有用[34]PDGFR胁制剂对隆突性。 果和剖释至合厉重样实质地对检测结，送和平、无污染、无降解[47]样本运送流程要确保种种样本运。 瘤属于罕见肿瘤骨与软构制肿，恶性肿瘤的0.2%恶性骨肿瘤仅占总共，所占比例也缺乏1%[1-3]软构制赘瘤正在成人恶性实体瘤中。亚型多多因为该病，性水准高、预后差且赘瘤性病变恶，大挑拨[4-6]给临床诊治带来巨。年来近，子遗传学起色相称急忙骨与软构制肿瘤的分，中起着额表厉重的功用不但正在临床病理诊断，学手脚等方面也拥有厉重代价[6-7]并且正在助忙临床拟订息养战术和预测生物。要领的展开和运用跟着新的分子检测，新病种也正在接续显示基于特定基因相当的，瘤原委分子检测也取得了从头了解以往少少分裂不明或未分裂的肿，正在从状态学分类转向分子分类骨与软构制肿瘤分类的根柢正。 的质控（如涵盖Q30等FASTQ质地参数）NGS数据的生物新闻剖释应包罗原始测序数据，接头序列去除、低质地序列去除等数据过滤及质控（引物序列去除、，过滤后数据Q30）厉重参考目标包罗，差别选用适当的比对软件和参考基因组序列比对及质控（DNA、RNA需，参考基因组的比例等）质控目标包罗比对至，深度、靶向区域笼罩度、插入片断长度等厉重参数样本测序质控（DNA应包罗panel的笼罩，reads总量等厉重参数）RNA应包罗靶向区域测序，剖释、说明和筛选以及变异的审定。类型的变异针对分歧，MSI、TMB及RNA层面的基因统一、表显子跳读等如DNA层面的碱基替代、插入/缺失、拷贝数变异、，息学技巧举办剖释采用特定的生物信，和临床样本举办技能验证并通过适量例数的尺度品，高通量测序检讨生物新闻学剖释技能条件应吻合国度卫生强健委临床检讨核心的，精确性和安定性保障剖释流程的。共鸣》《二代测序技能正在肿瘤精准医学诊疗中的运用专家共鸣》等共鸣的基础条件[44送检样本及统共测序和剖释讲述流程应吻合《临床分子病理实行室二代基因测序检测专家，50]47-。 前目，构制肿瘤中的运用较为有限靶向或免疫息养正在骨与软。瘤和炎性肌纤维母细胞瘤等除骨大幼胞瘤、胃肠道间质，疫息养仍处于临床试验阶段其余无数肿瘤的靶向或免。的发展期赘瘤患者对付无尺度息养，测寻找潜正在的药物靶点可试验通过NGS检，患者可以得回加入临床试验的机遇靶点阳性但无相应药物符合证的。前目，剂（sirolimus）、PARP胁制剂（olaparib、niraparib、talazoparib）、EZH2胁制剂（tazemetostat）等正正在举办临床试验的药物包罗MDM2胁制剂（milademetan）、CDK4/6胁制剂（palbociclib、abemaciclib）、mTOR胁制。试验接续展开跟着新的临床，更多的息养机遇患者可以取得。 告分为4个个人实质：1）基础新闻1份尺度的肿瘤NGS基因检测报，息、临床新闻、检测项目和日期等包罗患者姓名、样本类型、病理信；检测结果2）基因，次检测结果明晰展示本，阅读便于；释和临床解读3）变异注，病性或效力影响剖释对变异情势举办致，预后判决和息养的相合注脚其与病理诊断、，临床息养计划与用药指引提倡依照指南与共鸣列出可以的；附录4），试剂、检测限定性、基因列表和参考文件等包罗质控新闻、检测技巧、检测鸿沟、检测。 骨与软构制肿瘤患者共鸣5：引荐发展期，programmed death-ligand 1差别采用IHC和NGS检测步调性灭亡因子配体1（，B等免疫息养合系分子符号物PD-L1）、MSI、TM，辅助免疫治依照结果疗千金药业